《表1 荧光定量PCR引物序列》

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《施氮量对荒漠区‘蛇龙珠’葡萄叶片质量的影响》

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将保存于-80℃的叶片样品采用CTAB法提取RNA[15]。以提取的总RNA为模板，用Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）试剂盒进行cDNA第1链的合成，将0.5～2μg纯化的总RNA反转录成第1链cDNA，作为实时荧光定量PCR的模板。其中，试验中使用实时荧光定量PCR仪（LightCycler 96Real-Time PCR System，Roche，瑞士），使用SYBR GreenⅠ（TaKaRa）试剂盒。以Actin为内参基因，引物序列见表1。反应程序为:95℃下变性30 s，95℃变性5 s，60℃下退火30 s，40个循环；95℃15 s，60℃30 s，95℃15 s。基因的相对表达量采用2-ΔΔCT计算。