《表1 VEGF、GRP78、HIF-1α引物序列》

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《黄连素调控GRP78表达对内皮细胞新生血管的抑制作用》

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采用qRT-PCR法。Trizol法提取各组HUVEC中总RNA，紫外分光光度计测定总RNA的纯度及浓度。根据反转录试剂盒说明书反转录合成cDNA第一链，采用qRT-PCR进行扩增，引物序列见表1。扩增条件:95℃预变性5min；95℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸5s，共扩增40个循环。计算公式Ratio=2-ΔΔCT，ΔCT1=对照目的基因CT值-对照内参基因CT值，ΔCT2=实验组目的基因CT值-实验组内参基因CT值，ΔΔCT=ΔCT2-ΔCT1。代入公式计算Ratio，即mRNA相对表达量。