《表3 3'RACE克隆PCR第一轮反应体系》

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《辣椒生育酚环化酶(TC)基因克隆和生物信息学分析》

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本实验采用RACE（Rapid amplification of c DNA ends）技术从辣椒中克隆生育酚环化酶基因TC，该技术由Frohman等（1988）首次提出，是一种以PCR反应为基础，利用通用引物和特异引物从低丰度转录本中快速扩增已知cDNA片段旁侧5'和3'末端的简单而有效的方法。技术流程如下:3'RACE克隆:通过两轮PCR反应，第一轮反应体系按下列组份配制（表3），反应条件:95℃5 min；95℃40 s，60℃30 s，72℃1 min 30 s，35个循环；72℃10 min。PRIMER:3'RACEP1:5'-gcagtggtatcaacgcagagtacTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN-3'；GJ231:5'-CTCCCTGGGGCAAATGGCATGTATC-3'。