《表2 基因引物序列：饲喂频率对哺乳仔猪生长性能和骨骼肌蛋白质合成的影响》

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《饲喂频率对哺乳仔猪生长性能和骨骼肌蛋白质合成的影响》

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实时荧光定量PCR测定背最长肌蛋白质合成相关基因，包括:INSR、IGF1、IGF1R、mTOR、RPS6、真核细胞翻译起始因子4E（EIF4E）、核心蛋白聚糖（DCN）、卵泡抑素（FST）、肌肉生长抑素（MSTN）、ⅡB型活化素受体（ACVR2B）和Ⅰ型活化素受体样激酶5（ALK5）。荧光定量PCR反应体系为10μL:2μL cDNA，2μL无RNA酶水，上、下游引物各0.5μL（5μmol/L）和5μL 2×KAPA SYBR FAST qPCR Kit M aster M ix。反应条件为:预变性95℃3 min，40个循环变性/退火/延伸（95℃20 s，60℃40 s）和熔解曲线过程（70℃至90℃，每5 s上升0.5℃）。以TATA盒结合蛋白（TBP）、拓扑异构酶Ⅱβ（TOP2B）和肌动蛋白（ACTB）作为内参基因，并用qBase软件中的geNorm计算内参基因的平均表达稳定值（M），确保内参基因选择的正确性，同时计算每个样本的校正参数（normalization factor），用来计算目的基因的mRNA相对表达量。基因引物序列见表2。