《表1 线粒体COXⅠmRNA测定的引物设计 (±s, n=7)》

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《安寐汤对失眠大鼠额叶皮质线粒体COXⅠ、ⅣmRNA和蛋白表达的影响》

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参照说明书首先进行总RNA抽提:大鼠组织样本用液氮研磨至粉末，加入1 mL Trizol溶液，吹打混匀，使组织充分裂解，静置5min；加入200μL氯仿，剧烈振荡混匀30 s，室温静置2 min；4℃下离心15 min，可见分为3层，RNA在上层水相，移至另一个新的RNase free EP管；加入等体积的异丙醇，轻柔地充分混匀，室温静置10 min以沉淀RNA；4℃下离心10 min，收集RNA沉淀，去上清；用75%乙醇洗涤两次，超净台风干；加入60μL DEPC水溶解沉淀。其次进行去基因组与总RNA纯度、完整性检测:使用RNase-free的DNase I配置反应液，37℃消化30 min，65℃灭活10 min后按步骤进行去基因组操作。总RNA纯度和完整性经核酸蛋白测定仪和1%琼脂糖凝胶电泳检测后无蛋白质污染和抽提比较完整。然后逆转录后进行mRNA定量。检测序列片段大小，内参片段GAPDH、目的片段COXⅠ和COXⅣ分别为124 bp、180 bp和130 bp。引物设计见表1。