《表2 正交试验结果：牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

为获得Ig M抗体间接ELISA检测方法的最佳反应条件，以MPB70蛋白作为包被抗原，结核病阳性牛血清作为阳性样品，健康牛血清作为阴性样品，进行检测，具体操作如下:用pH9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释抗原，100L/孔，4℃包被过夜，弃去包被液；TBST洗涤6次，加入含有5%鸡血清的TBST封闭液，200L/孔，37℃封闭2 h；TBST洗涤6次，加入待检血清，100L/孔，37℃反应1h；TBST洗涤6次，加入TBST稀释的鼠抗牛Ig M抗体，100L/孔，37℃反应1 h；TBST洗涤6次，加入TBST稀释的HRP标记的山羊抗鼠Ig G抗体，100L/孔，37℃反应1 h；TBST洗涤6次，TMB室温显色15 min，1mol/L HCl终止反应，酶标仪读取D450值。利用正交试验从下述参数中筛选最佳反应参数（表2）:抗原包被浓度设为0.1、0.5、1、2、4g/m L；血清稀释梯度为1∶50、1∶100、1∶150、1∶200、1∶300；鼠抗牛Ig M稀释度为1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶3 000、1∶4 000；山羊抗鼠Ig G的稀释度为1∶40 000、1∶50 000、1∶60 000、1∶70 000、1∶80 000。根据检测结果，计算P/N值，获得最佳反应体系。