《表2 反应体系：雷洛昔芬通过抑制神经细胞凋亡保护脑缺血大鼠脑细胞的机制研究》

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《雷洛昔芬通过抑制神经细胞凋亡保护脑缺血大鼠脑细胞的机制研究》

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取大鼠血清，利用RT-PCR方法检测血液中miRNA-21、miRNA-29因子的表达水平。利用总miRNA快速提取试剂盒提取总RNA，并使用miRNA特有的逆转录引物，将其与Super M-MLV逆转录酶进行反向转录，反转录体系:（1）5×PrimeScript Buffer 4μl；（2）1×PrimeScript RT Enzyme Mix 1μl；（3）Oligo d T Primer（50μmol）1μl（25 pmol）；（4）Random 6mers（100μmol）1μl（50 pmol）；（5）Total RNA1μl；RNase Free d H2O 12μl。RT-PCR在实时定量系统中上进行，扩增条件:（1）预变性:95℃时10 min；（2）变性:94℃时30 s、退火/延伸:60℃时1 min，两个步骤40个循环；（3）融解曲线分析:95℃时15 s、60℃时1 min、94℃时15 s和60℃时15 s。引物设计（见表1）；反应体系（见表2）。