《表1 电转染条件摸索实验设计》

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《融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化》

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注:U-023、U-024、U-030是Amaxa Nucleofector-II电转仪自带的电转程序，适用于CHO细胞的电转。

将线性化的重组质粒进行以下电转染条件的摸索:电转染程序、质粒用量和细胞用量，具体转染实验设计见表1，首先在细胞用量为1×107个/孔，质粒用量为10μg/孔的前提下，摸索并确定最佳的电转染程序（U-023、U-024、U-030），接着利用最佳的电转染程序，在细胞用量为1×107个/孔的前提下，摸索并确定电转最佳的质粒用量（5、10、15、20μg/孔），最后在最佳的电转染程序和最佳的质粒用量前提下，摸索并确定电转最佳的细胞用量（1×107、1.5×107、2×107个/孔）。电转染前，6孔板中各加入2.5 mL细胞传代培养基，37℃培养箱预热；取CHO-S细胞计数，计算使用的细胞体积；电转染按Amaxa Cell line Nucleofector kit V转染试剂盒操作程序进行；电转染后，6孔板置于36.5℃、5%CO2培养箱静置培养，48 h后取0.5 m L细胞液检测细胞活率和活细胞密度，另取0.5 mL细胞液1000 r/min离心5 min，上清用Octet Qke Refurb检测仪检测蛋白表达量，综合细胞的生长和蛋白表达量判断最佳电转染条件，并最终对比融合蛋白与抗体表达质粒的电转效果。