《表1 牡蛎样品平均Tm值》

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《食品过敏原牡蛎成分PCR检测方法的初步研究》

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本实验分别对所收集样品进行SYBR Green I实时荧光PCR检测，获得了S型扩增曲线，得到PCR仪分析出的从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数Ct值，结合熔解曲线与其对应的熔解温度（Tm）分析得到的特征峰（见图5），平均Tm值通过对各个样品收集数据计算出为80.08℃平均Ct值为19.40（见表1），所有牡蛎样品的Ct值和Tm值与阳性对照相符，由此通过基于SYBR Green I的熔解曲线分析荧光PCR方法可以快速的检测牡蛎成分。在实验过程中初步退火温度选择为60℃时，阴性样品中蛤蜊样品与扇贝样品出现了非特异性扩增。在进一步的实验中，分别选择61～68℃作为退火温度进行实验，当退火温度为63℃时，蛤蜊的Ct值在35左右，扇贝的Ct值在38左右，从熔解曲线分析可知牡蛎样品的特征峰值更高，而蛤蜊、扇贝等样品的特征峰偏低并且Tm值较牡蛎低。随着退火温度的升高（61～64℃）蛤蜊、扇贝样品的Ct值、Tm值下降但仍存在一部分非特异性扩增的情况，当退火温度提升至65℃时，基本能消除非特异性扩增，阴性样品均无S型扩增曲线出现，并且无特征峰和相应的Tm值（见图6），而退火温度提升至68℃时，虽然非特异性扩增被完全消除，但阳性样品的扩增也会受到一定抑制（见表2）。