《表2 各中药活性成分对Ⅳ型胶原酶的作用Tab.2 Effect of active components of TCM on typeⅣcollagenase》
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《Ⅳ型胶原酶模型的建立及其在中药活性成分筛选中的应用》
96孔细胞板中,每孔加入100μl pH7.4 50mmol/LTris缓冲液(含10 mmol/LCaCl2、10μmol/L ZnCl2、0.05%月桂醇聚氧乙烯醚),依次加入5.0×10-5g/LⅣ型胶原酶溶液30μl、样品药液20μl,振摇混匀,室温放置10 min,再加入底物琥珀酰明胶溶液20μl,振摇混合均匀,37℃水浴中酶切反应30min。空白组以加热处理失活的酶代替酶标准品,并以等体积溶剂代替药液;阴性组以等体积溶剂代替药液(见表1);为消除样品药液对吸光度值的影响,各样品药液设立相应的药物对照孔即不加酶和底物,其它操作相同,体积不足以去离子水补齐。然后每孔加入10μl 0.2 mol/L HCl终止酶切反应,再以10μl 0.2 mol/L NaOH调节体系pH至8.0,加入0.05%TNBS显色剂60μl,振摇,40℃水浴显色30min完全显色,冷却至室温后,360 nm处测定吸光度值。Ⅳ型胶原酶的抑制剂盐酸四环素作为阳性药随行对照[18]。实验每次每药液设置8个复孔,实验重复3次,计算抑制率(见表2)。
图表编号 | XD0036490300 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.02.28 |
作者 | 薛南南、曹寅秋、房康、陈萌、张欣钰、王辉、吴高荣、贾晓慧、郭文博、王鹏龙、雷海民 |
绘制单位 | 北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院、北京中医药大学中药学院 |
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