《表1 SRAP引物序列:黄帝手植柏DNA指纹图谱的构建》

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《黄帝手植柏DNA指纹图谱的构建》


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SRAP分析基本采用LI et al[7]的方法,并针对侧柏样品特质,进行了一些改良,使用的SRAP引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成,序列见表1。反应体系:约50 ng DNA,2.5 mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.4 mmol·L-1上游引物,0.4 mmol·L-1下游引物,1×PCR buffer,1.5 U Taq DNA聚合酶,补水至25μL。PCR反应程序:94℃变性5 min;第一次5个循环(94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1.5 min);第二次30个循环(94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1.5 min);最后72℃延伸10 min。PCR仪为S1000 Thermal Cycler(BioRad Laboratories,Inc.,美国)。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DNA片段。