《表2 TAIL-PCR操作步骤》

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《一种新型抗菌肽基因决定簇的克隆与序列结构特征》

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TAIL-PCR扩增包括3次扩增，即预扩增（Pre-PCR）、初扩增（Primary TAIL-PCR）和再扩增（Secondary Tail-PCR）[10]。预扩增以菌株S62-9的质粒作为模板，分别以LAD1、LAD2、LAD3、LAD4与LB0作为上下游引物进行扩增。反应体系为25μL，包括1μL LAD引物，0.5μL LB0引物，12.5μL 2XEASY MIX Taq，1μL模板DNA，10μL ddH20。预扩增所得产物稀释100倍后取1μL作为Primary TAIL-PCR的模板，以AC1和RB1作为引物，进行第一次巢式扩增。Primary TAIL-PCR扩增产物稀释200倍后取1μL作为Secondary TAIL-PCR的模板，以AC1和RB0引物进行扩增。3次扩增的程序步骤如表2[11]。TAIL-PCR产物经过1%的琼脂糖凝胶电泳检测。