《表1 检测胆囊组织中nAchRα7 mRNA表达的基因引物及产物长度》

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《电针下合穴阳陵泉等对急性胆囊炎模型豚鼠血清TNF-α及胆囊组织nAchR α7 mRNA的影响》

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采用实时荧光定量PCR法检测，具体步骤如下:（1）提取组织总RNA:按Trizol试剂方法取保存在Trizol 1中的胆囊组织0.02 g，加入1 mL于匀浆器中充分研磨匀浆，混匀后室温裂解3 min，加入0.2倍体积的三氯甲烷，震荡，室温静置3~5 min后12 000 r/min，15 min取上层液相，加入等体积的的异丙醇，-20℃静置20 min后12 000 r/min，5 min低温离心，去上清，沉淀中加入75%乙醇1.5 mL再次以12 000 r/min，5 min低温离心后空气干燥。（2）逆转录cDNA:1μLoligodT、无菌DEPC处理水及RNase抑制剂各2μL注入含RNA的离心管中，65℃加热10 min，之后冰上静置约2 min，予2μL无菌DEPC处理水、40 mL AMV缓冲液、0.3μL RNase抑制剂、2μL d NTP及2μL逆转录酶，40℃水浴90 min。（3）进行PCR扩增目的基因和β-actin基因。PCR反应条件为:95℃、10 min，95℃、10 s，72℃、100 s，60℃延伸50 s。采用SYBR法，在NCBI上搜索目的基因的序列，运用primer5软件，计算组织中nAchRα7 mRNA表达，目的基因和β-actin基因引物序列和产物长度如表1。