《表3 引物探针信息:空肠弯曲菌快速检测试剂盒研制及AOAC验证》

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《空肠弯曲菌快速检测试剂盒研制及AOAC验证》


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针对空肠弯曲菌特异hip O基因设计特异的引物探针。经NCBI BLAST后,确保不与其它菌种发生交叉反应。内部扩增对照(Internal Amplification Control,IAC)DNA为鱼败血病病毒的一段基因(accession no.X66134),前后分别添加hip O上下游引物,因此IAC与hip O共用引物,但探针不同,空肠弯曲菌检测探针用FAM标记,IAC检测探针用VIC标记(表3)。IAC DNA共136 bp:GCAAAGAAGCAG CATAAATAGGATCGACCAGCTCAACTCAGGTGT CCTCATGAATTTGAAGACATAAACAAGGGACTG GTCTCCGTCCCAACCAAGATCATCCATCTCCCTT CCAATAACTTCAATGCTATAACTA,黑色加下划线部分是鱼败血病病毒基因的一段序列。IAC DNA由上海辉睿生物科技有限公司合成。将IAC DNA克隆至p GH载体(长度3 053 bp)上,并转移至包含甲基化酶的大肠杆菌中,采用质粒提取试剂盒提取质粒DNA。DNA质量浓度计算公式同1.2.1.3节,其中n代表质粒长度(3 053 bp)。