《表2 pMD-2A11和pBI121-Gus质粒双酶切反应体系》

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《用单性结实基因2A11-iaaM转化罗汉果的研究》

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由于iaaM基因序列内含HindⅢ限制性酶切位点，所以载体构建中，先连接启动子2A11，再连接目的基因iaaM。pMD-2A11质粒和pBI121-Gus质粒双酶切反应使用Xba I和HindⅢ限制性内切酶，反应条件为37℃2 h，酶切反应体系见表2。将上述酶切反应产物分别进行切胶回收目的片段和载体片段，并检测回收片段的质量和浓度。配制连接反应体系:10×T4 DNA Ligase Buffer 2.5μL，目的基因4.5μL，载体1.5μL，T4 DNA Ligase（350 U·μL-1）1.5μL，加水至总体积20μL，16℃水浴连接过夜。