《表1 反应混合液的配置组成》

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《不同Ca~(2+)浓度下猪肉肌球蛋白的热聚集体机制研究》

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参照文献[17-18]的方法，略做修改。将蛋白溶液调至4 mg/m L，分别选取4、20、30、40、50、60、70℃进行样品收集，按照表1配置反应混合液，配置时先将除ATP以外的溶液加入混匀，将反应混合液放于25℃水浴锅中恒温。之后加入ATP溶液，立即开始计时。反应进行3 min，加入2 m L 15%TCA（三氯乙酸）终止反应，之后10 000 g离心2 min，取上清。空白组首先加入TCA，之后加入ATP。吸取4 m L上清液，分别加入3 m L 0.05 mol/L Tris-马来酸缓冲液（p H值7.0），振荡混匀，之后加入3 m L定磷试剂（20%维生素c，3 mmol/L H2SO4，3%钼酸铵以等体积混合），放于45℃水浴锅中恒温30 min，取出冷却，测定各组溶液640 nm波长处吸光度。每个样品测定3次平行，通过磷酸标准曲线计算无机磷酸量，取平均值。