《表1 Phage-ELISA加样表Tab.1 The loading of Phage-ELISA》

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《抗人CD147纳米抗体的筛选与鉴定》

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为鉴定筛选的克隆是否能特异性地结合CD147蛋白，采用Phage-ELISA方法进行鉴定。从3轮洗脱物滴度转接的平板上，随机挑取一定数量的单菌落接种LB/葡萄糖2%/Amp，37℃，170×g，至600 nm处吸光度为0.3~0.5（约3.5 h），加入M13KO7辅助噬菌体（感染复数1∶1），37℃，170×g，培养1 h，3000×g离心10 min，加入等体积的LB/Amp/Kan培养基重悬细胞，30℃，250 r/min振荡5~8 h，7746×g离心10 min，收集上清。将CD147蛋白稀释成5 mg/L，100μl/孔，4℃包被过夜，PBST洗3次，加入4%脱脂牛奶，37℃封闭2 h，随后加入PEG-Na Cl纯化的噬菌体，100μl/孔，37℃，孵育1 h，加入HRP/anti-M13，37℃孵育1 h，TMB显色液孵育8 min，2 M H2SO4终止，测定450 nm处吸光度（A）。分组情况见表1所示。A样品/A阴性对照>3时，即认定筛选的噬菌体单克隆为阳性。