《表2 Capture-SELEX的筛选条件》

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《Capture-SELEX技术筛选β-苯乙胺核酸适配体》

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2）孵育第1轮筛选体系为1 m L，固定ssDNA文库的磁珠与靶标（β-苯乙胺，初始浓度为0.1 mmol/L)37℃孵育2 h，与靶标特异性结合的ss DNA从磁珠上解离下来，在缓冲液中形成ss D-NA-靶标复合物。从第2轮开始，筛选孵育体系为300μL，每轮的筛选条件如表2所示。随着筛选轮数的增加，为获得高亲和力的适配体，逐渐增加筛选压力，包括减少ss DNA文库用量，靶标的浓度以及孵育时间。此外，为了提高适配体的特异性，从第5轮开始进行反筛，加入靶标的结构类似物———酪胺、酪氨酸、苯丙氨酸、组胺、色胺和多巴胺作为反筛靶标与ss DNA文库孵育，弃包含反筛靶标-ss DNA复合物的上清液，清洗磁珠后再加入靶标孵育。反筛，可以去除与靶标结构类似物结合的ss DNA。