《表6 天根试剂盒法提取金黄色葡萄球菌基因组质量浓度和纯度分析》

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《食品检测用4种病原菌基因组试剂盒提取方法的比较与优化》

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从表4可见革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌分别按照OMEGA和天根的试剂盒提供的标准提取方法提取的基因组浓度均不高，并且天根试剂盒提取的基因组A260/A230比值较低，为1.2。这可能是由于革兰氏阳性菌细胞壁结构较为复杂，难以破壁，导致提取的基因组浓度较低。因此拟通过延长溶菌酶的作用时间，提高金黄色葡萄球菌的破壁效果，达到提高基因组浓度的目的。为获得溶菌酶对金黄色葡萄球菌的最佳破壁时间，本研究对金黄色葡萄球菌的溶菌酶作用时间做了时间梯度试验，结果如表6所示。破壁时间小于4 h，基因组质量浓度和纯度均不理想，而随着破壁时间的延长，金黄色葡萄球菌基因组质量浓度逐渐提高，当破壁时间延长至12 h时，质量浓度可达74.5 ng/μL，比破壁1 h时的质量浓度提高了4倍，A260/A280和A260/A230的值也随着升高，在1.7～2.0之间，符合标准物质的要求，因此选择溶解酶裂解菌体12 h作为将来大量制备金黄色葡萄球菌基因组核酸标准物质的处理时间。以上结果说明对于革兰氏阳性菌，提取基因组的关键是有效破壁，细胞壁裂解是影响基因组质量浓度和纯度的关键。