《表1 引物序列：通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞TLR的影响》

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《通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞TLR的影响》

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将培养瓶从培养箱中取出，弃上清液，铺板，加入不同浓度通络止痛方，对照组加入培养液。继续放入培养箱中培养过夜。用Trizol提取滑膜组织总RNA，检测其纯度及完整性后将RNA逆转录合成c DNA，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。将北京百诺威公司提供内参GAPDH及上下游引在样品液中加入各1μL，引物序列见表1。反应体系25μL，经过95℃预变性2 min，95℃变性30 s，60℃退火30 s，60℃延伸30 s，扩增35个循环后70℃延伸10 min进行荧光检测，由电脑自动分析并计算出反应体系中待测样品c DNA达到设定阈值的循环数（CT值）并计算2-ΔΔCT值，其中，ΔΔCT=(Cttarget-Ct GAPDH）加药组-（Cttarget-Ct GAPDH）对照组。