《表1 3对SSR引物序列》

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《以本地早橘和槾橘为母本倍性杂交创制柑橘三倍体》


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基因组DNA提取参照CHENG等[19]的方法,DNA浓度和质量用Nano Drop 1000紫外分光光度计(Thermo Scientific,USA)检测。DNA原液用TE缓冲液稀释至约50 ng·μL-1。SSR引物(表1)由上海生工生物工程股份有限公司合成。SSR分析方法具体如下:PCR体系为10μL:2×PCR反应mix(Vazyme)5μL,正反向引物各0.1μL,DNA模板1μL,灭菌超纯水3.8μL。PCR反应在Pro Flex PCR仪(ABI,USA)上进行,扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性60 s,55℃退火30 s,72℃延伸60 s,32个循环;72℃延伸7 min;最后12℃保存。扩增完成后,PCR产物在恒定电压95 V条件下,用2.5%Metaphor琼脂糖凝胶(Lonza,USA)电泳约1 h后用凝胶成像系统(BIO-RAD,USA)拍照。