《表1 野生型P.genaculita D-MIase和P.genaculita D-MIase突变体的50℃半衰期》

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《Pseudomonas geniculata D-甘露糖异构酶的热稳定性改造及发酵优化》

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构建获得的重组P.genaculita D-MIase突变体分别摇瓶发酵，SDS-PAGE蛋白电泳结果显示大约在43 k D处出现明显的蛋白特异性条带（图3），与文献报道的分子量大小一致，表明重组P.genaculita D-MIase突变体基因成功在E.coli BL21 （DE3）表达。经凝胶柱Superdex 200纯化，纯化结果（图4）。纯化后的酶液分别置于50℃水浴保温并定时取样，测定样品残留酶活以确定50℃温度稳定性。研究发现突变体C126A和E402W热稳定性最好，相比野生型50℃半衰期均提高了50%。在此基础上对上述两位点进行叠加突变，获得突变体C126A/E402W，50℃半衰期比野生型提高了75%（表1）。