《表1 引物序列：血清miRNA-125b与miRNA-21联合检测对前列腺癌的诊断价值》

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《血清miRNA-125b与miRNA-21联合检测对前列腺癌的诊断价值》

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在患者入院后次日清晨取空腹静脉血清5 m L，促凝，静置30 min，4℃、3 500 r·min-1离心5 min，取血清于1.5 m L离心管、-80℃冰箱保存待测。严格按照试剂盒说明书提取血清总RNA，260/280吸光度在1.8～2.2之间为合格标本，可进行逆转录合成cDNA。逆转录反应体系:1μg RNA，dNTP（5×RT）1.0μL，RNA酶抑制剂（40 U·μL-1）0.5μL，逆转录酶（200 U·μL-1）0.2μL，余以双蒸水补足至20μL，逆转录条件:16℃35 min，42℃35 min，75℃10 min。完成cDNA后，以定量荧光PCR仪、荧光定量PCR试剂盒，来扩增目的基因，U6为内参基因，miRNA-125b、miRNA-21、U6引物序列见表1，反应体系:cDNA产物1.0μL，qPCR Mix10μL（2×miRNA），Forward primer、Reverse primer各0.4μL，余用dd水补齐至20μL，扩增条件:94℃预变性5 min，94℃30 s、60℃320 s、72℃30 s，共40个循环，均设立3个复孔。根据RT-qPCR曲线得到Ct值，表示荧光达到阈值的循环数，血清miRNA含量采用相对表达量2-△△Ct表示[4]。