《表1 PCR引物序列：血清spHBV及PIVKA-Ⅱ联合检测对HBV所致肝癌的预测价值》

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《血清spHBV及PIVKA-Ⅱ联合检测对HBV所致肝癌的预测价值》

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血清spHBV DNA和wtHBV DNA浓度检测实验仪器ABI7600荧光定量PCR分析仪，血清PIVKA-Ⅱ浓度水平检测使用仪器雅培I2 000。荧光定量PCR（Real Time Quantitative-PCR，qRT-PCR）检测血清spHBV和wtHBV基因，按照DNA提取试剂盒（达安基因公司）说明书提取收集标本中的DNA。spHBV和wtHBV基因应用Oligo 7软件（Molecμlar Biology Insights，Inc.Co，USA）设计引物，委托上海Invitrogen英潍捷基公司合成，相关基因的引物序列见表1。应用ABI7 600荧光定量PCR分析仪分别检测血清标本spHBV DNA和wtHBV DNA，PCR扩增体系为：10μL PCR mastermix(1 mmolL），上下游引物各0.4μL(20μmolL），2μL模板cDNA，7.2μL去离子水补足至20μL。PCR扩增先经预变性95℃10 min，然后进入50个扩增循环：95℃变性10 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，最后72℃延伸10 min。血清spHBV即通过（spHBVDNA/wtHBVDNA)*100%来表示，所有实验重复3次。