《表1 肝细胞HBV DNA及ccc DNA定量检测引物列表》

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《肝癌患者血清乙肝病毒e抗原与肝细胞HBV cccDNA水平的相关性》

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注:引物在HBV基因组上定位参考HBV C型标准株序列 （Genebank号:X04615）

使用QIAamp DNA Mini kit（QIAGEN，德国）提取血清及组织HBV DNA，使用ABI 7500荧光定量PCR仪（Life Technologies Corporation，美国）检测血清HBV DNA及组织ccc DNA。定量检测方法参考文献[12]，使用质粒安全ATP依赖的NDA酶处理肝细胞总DNA，获得HBV DNA及ccc DNA，使用Taqman荧光探针PCR法检测HBV DNA及HBV ccc DNA，使用引物F1和R1，Taq Man探针P1，对组织HBV ccc DNA进行定量，使用引物F2和R2，Taq Man探针P2对组织HBV DNA进行定量。组织内HBV DNA和ccc DNA定量均参考组织甘油醛3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GADPH）定量进行标准化[13]，各引物序列详见表1。