《表3 不同调控措施下土壤细菌群落多样性分析》

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《施加石灰石粉和微生物肥料对发病山核桃林土壤化学性质和微生物群落的影响》

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说明：采用Duncan新复极差法进行多重比较，同一时间内每列不同字母表示在0.05水平下差异显著

对4次采集的土壤细菌进行PCR-DGGE分析（图3），不同的条带代表不同的细菌基因片段，每个泳道中条带的亮度反映出细菌相对生物量的多少。首先对培养20 d土壤DNA进行PCR-DGGE，将几个优势条带割胶，用相同的引物扩增，用作定位标记（Marker），目的是分析这些优势条带的动态变化，再分析不同培养时间土壤细菌的DGGE。结果表明：培养20 d时，不同处理条带存在差异，但同一处理3个重复之间相似度很好，说明培养实验控制良好。所有处理有3条较亮的共性条带（条带1、4、6），条带6不受处理影响，而条带1则是菌液处理亮度反而最弱，条带4则是复合微生物肥料处理稍微弱一点。个性条带分析发现，条带5最亮，该条带由目标菌———芽孢杆菌WK1产生，同时发现复合微生物肥料处理土壤其条带5的亮度比对照和石灰石粉处理高。条带2是石灰石粉处理的特征条带，但培养到40 d时，菌液处理也出现条带2。随着培养时间的增加，大部分条带变化不大，而作为菌液的优势条带5在菌液处理在120 d之内一直保持最强亮度，说明添加的芽孢杆菌能很好地与土壤微生物竞争而繁殖生长，但发现条带5的位置在40 d时出现新的条带，推测新条带与原条带的间隔随着培养时间的增加而增加，因为PCR-DGGE的条件完全相同，推测可能是原土壤存在的菌，因生长状况良好，而被优先扩增出来。根据细菌PCR-DGGE图谱中条带位置和亮度的数值化结果，计算得细菌的多样性指数、均匀度指数和丰富度指数（表3）。多样性指数越大表示微生物群落多样性越高，均匀度指数说明不同物种的数量均等程度，丰富度指数高则说明物种数目多。多样性指数结果分析表明：ck处理多样性指数在整个培养过程中高于其他处理，60 d之前显著（P<0.05）高于SL和MCF处理，说明添加菌液、施用微生物肥料降低了细菌的生物多样性；LP处理在前40 d时与对照持平，60 d时显著（P<0.05）低于对照，但高于（P<0.05）菌液和复合微生物肥料处理。不同处理之间丰富度指数差异变化规律与多样性指数一致。SL处理土壤细菌均匀度指数和其他3种处理相比，存在显著差异（P<0.05），而LP、MCF和ck等3种处理间细菌均匀度指数没有差异。