《表3 高产羟基脯氨酸的基因工程菌构建方法Table 3 Construction methods of high-yield hydroxyproline genetic engineering b

《表3 高产羟基脯氨酸的基因工程菌构建方法Table 3 Construction methods of high-yield hydroxyproline genetic engineering b   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《反式-4-羟基-L-脯氨酸的研究进展》


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注:1) L-脯氨酸脱氢酶;2) γ-谷氨酰激酶;3) γ-谷氨酰磷酸还原酶;4) 脯氨酸-4-羟化酶;5) 二氢吡咯羧酸还原酶;6) N-乙酰谷氨酸激酶.

2000年,Shibasaki将脯氨酸-4-羟化酶基因与抗反馈抑制的γ-谷氨酰激酶proB基因和γ-谷氨酰磷酸还原酶proA基因一起在大肠杆菌W1485/ΔputA中表达,以葡萄糖为碳源,发酵96h产生25g/L的羟基脯氨酸,由于不用额外添加L-脯氨酸,因此生产成本更低[34].近年来,国内对发酵法生产羟基脯氨酸的研究也日益增多,主要是以大肠杆菌为宿主菌,根据羟基脯氨酸的代谢途径进行改造.2015年胡丹丹等通过对大肠杆菌谷氨酸激酶突变得到突变基因proBA2,降低L-脯氨酸对谷氨酸激酶的反馈抑制作用,通过摇瓶发酵生产反式-4-羟脯氨酸产量为0.22g/L[35].盛花开等首次将proB,proA,proC和p4h4个基因在同一质粒上表达,在不添加脯氨酸时,摇瓶发酵Hyp的质量浓度为0.16g/L[36].表3是不同基因工程菌产羟基脯氨酸的含量对比.2017年,王晓姣等以E.coli BL21(DE3)ΔputA为出发菌株,利用基因敲除技术阻断L-谷氨酸到精氨酸的分支途径,增加L-脯氨酸合成代谢流,摇瓶发酵产生312.67mg/L的羟基脯氨酸,但是在发酵培养基中需要添加脯氨酸和精氨酸,增加了成本[37].