《表2 萌发培养基与根诱导培养基》

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《大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定》


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参照表2配制萌发及根诱导培养基,并参照Cheng等[23]方法进行根毛转化。步骤如下:(1)将大豆种子灭菌,取饱满没有病斑的籽粒置干燥器中,在干燥器中放一个200 m L烧杯,盛96 m L次氯酸钠和4 m L浓盐酸,灭菌12~16 h。(2)根据表2配制大豆萌发培养基,在无菌操作台中将已灭菌的大豆种子均匀摆放到萌发培养基。(3)大豆种子萌发5 d左右,根据表2配制发根培养基,在无菌操作台中利用手术刀在大豆的子叶上面切一个小洞。然后将处理的大豆子叶均匀放置到发根培养基上,取20μL含有目的载体的农杆菌K599放到大豆子叶的小洞中。(4)将培养基放在大豆无菌培养室中,培养15 d左右,从大豆子叶的侵染部位会有根毛长出,分别收集大豆的根毛于液氮中速冻。