《表1 引物信息：雨生红球藻HaeDGAT2-3的分子克隆和生物信息学分析》

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《雨生红球藻HaeDGAT2-3的分子克隆和生物信息学分析》

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对来自莱茵衣藻CC3491、小球藻ATCC 30412以及三角褐指藻的DGAT2进行序列比对，从而获得高度保守序列；在此基础上，利用CODEHOP软件进行设计雨生红球藻DGAT2的2段同源克隆引物（F1、R1和F2、R2）。以获得的雨生红球藻c DNA为模板，按照Ta Ka Ra LA TaqR扩增体系进行PCR扩增，从而获得雨生红球藻Hae DGAT2-3的同源克隆片段。RACE c DNA模板的制备按照试剂盒（SMARTer TM RACE c DNA Amplication Kit）说明书进行。在同源克隆片段的基础上获得5′端和3′端引物（5′RACE R3、R4和3′RACE F3、F4）。以RACE c DNA为PCR扩增模板，以5′端和3′端引物为PCR扩增引物获得目的基因两端（5′端和3′端）的片段。通过DNAStar Seq Man软件对中间以及5′端和3′端RACE片段进行拼接获得雨生红球藻HaeDGAT基因c DNA序列全长，并据此设计表达框引物（F5、R5）。所用引物信息如表1所示，均由上海生工生物工程有限公司合成。