《表5 TLR4野生型和两种不同敲除类型的序列信息》

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《Toll样受体4(TLR4)基因剔除小鼠构建及初步表型分析》

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“Bold italics”indicates the guideRNA target site sequence，“．”Indicates an omitted sequence，and“-”indicates a knockout sequence

图1所示为TLR4-/-小鼠构建策略，敲除TLR4基因2号外显子（exon 2）区域，造成相应区域的蛋白序列缺失和因1，3外显子拼接导致的读码框移码，造成TLR4基因功能缺失。300枚经过显微注射的C57BL/6小鼠受精卵移植到15只ICR假孕鼠输卵管中，共出生31只F0代小鼠（出生率为10.3%），基因型鉴定表明其中，19只小鼠中能检测到Cas9/sgRNA作用后的变小条带（阳性率61.3%），鉴定策略如图2a所示。选择阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代敲除杂合子小鼠；经PCR鉴定加产物测序确定获得2种基因敲除F1代小鼠类型:敲除类型1为缺失825个碱基对；敲除类型2为缺失817个碱基对，敲除后的具体序列信息如表5所示，F1代小鼠鉴定代表图如图2b所示。选择敲除类型2型的TLR4+/-小鼠用于后续繁育和实验，通过杂合子小鼠自交获得TLR4-/-小鼠以及其他基因型小鼠，杂合子自交后代小鼠鉴定代表图如图2c所示。