《表3 引物设计：化肝煎对HSC-T6细胞TGF-β1、CTGF及MAPK1表达的影响》

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《化肝煎对HSC-T6细胞TGF-β1、CTGF及MAPK1表达的影响》

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取对数生长期的1～5×105HSC-T6细胞均匀接种于12孔板，随机分成6组（模型对照组，2.5%、5%、10%、20%和40%化肝煎含药血清组），各体积浓度含药血清组添加“2.2”项下优化后的含药血清终体积分别为2.5%，5%，10%，20%和40%。培养48 h后，采用Trizol法抽提各组细胞中总RNA，核酸蛋白测定仪测定RNA的量及纯度，A260/A280均在1.8～2.0方可继续往下进行。将总RNA逆转录成cDNA，在7300plus实时荧光定量PCR仪上进行实时定量扩增。SYBR反应体系20μL，反应条件:95℃30 sec，1个循环；95℃5 sec，55℃30 sec，72℃30 sec，40个循环；95℃15 sec，60℃1 min，95℃15 sec，1个循环。所有样本的最终Ct值取平均值。计算公式:相对表达量=2-ΔΔCt，其中，ΔΔCt=实验组（Ct目的-Ct内参）-对照组（Ct目的-Ct内参）。基因引物设计见表3。