《表1 Carbomix H型色谱柱上不同有机酸保留时间》

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《生物样品中有机酸的离子排斥色谱测定方法进展》


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注:1~11色谱条件及数据来源于http://www.sepax-tech.com.cn/,12~16色谱条件及数据来源于文献[14]。“-”为未经实际测试尚未获取的保留值数据。

离子排斥色谱一般采用表面键合磺酸基团的不同交联度聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物微粒(PS/DVB-SO3H)作为分离介质(色谱填料),键合相一端裸露的磺酸氢质子是产生分离选择性的主要官能结构。离子排斥色谱的分离机制广泛被认为是Donnan排斥理论[14,18],此外还可能包含空间排斥、吸附和配位体交换等机理,多种作用模式使分离介质具备良好的有机酸分离能力。由于分离介质表面存在大量质子,在Donnan排斥过程中,分离介质与化合物间被假定存在一层Donnan膜,强酸电解质向填料渗透时被膜排斥,而弱酸电解质可穿透膜进入填料,因此产生了色谱保留。在色谱分离过程中,一元羧酸的分离主要受Donnan排斥和吸附作用,二元、多元羧酸的分离同时还受到空间排斥作用,上述作用使得不同性质的小分子有机酸和大分子有机酸得到了良好的分离。相比反相液相色谱而言,上述离子排斥色谱的分离机制充分体现了其对强弱电解质组分的分离选择能力,在实际应用中,样品基体中的强电解质干扰物在离子排斥色谱柱上被优先洗脱,同时对弱保留目标组分几乎不产生干扰,加强了对目标组分的定性定量能力,这种特殊的分离选择性在反相色谱柱上是很难实现的。离子排斥色谱的有机酸检测适用范围较广,几乎涵盖了生物样品中常见的有机酸化合物,常见有机酸化合物在美国Sepax公司生产的Carbomix H型色谱柱上的保留情况见表1。不同型号色谱柱对多种有机酸化合物均具有较好的分离选择性,这与其独特的分离机制密切相关,此外色谱条件只采用浓度极低的稀酸溶液作为等度洗脱的流动相,因此采用离子排斥色谱进行有机酸的检测具有经济、绿色环保、普适、简便等特点。