《表1 反转录过程:EGF对猪卵母细胞体外成熟的影响》
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反转录过程主要按照试剂盒说明书步骤并进行了一些改进:(1)DNA基因组去除全程应在冰上操作,每管加入1μL 10×dsDNase Buffer、1μL dsDNase至10μL反应体系;混匀,离心,37℃孵育2 min,取出放于冰上。(2)基因组DNA消除后,将下列试剂按指定顺序加入同一试管中:0.25μL oligo(DT)18 Primer、0.25μL random hexamer primer、1μL 10 mmol/L dNTP Mix,再加nucleasefree水至15μL,振荡混匀,离心,65℃孵育5 min。(3)孵育后按顺序将下列组分加入反应管中:4μL5×RT Buffer、1μL Maxima H Minus Enzyme Mix,振荡混匀,离心,最终体积为20μL。然后进行反转录,反转录过程见表1。逆转录反应产物可直接用于q PCR,也可在-20℃保存1周。如需存储更长时间,建议在-70℃保存,以避免c DNA循环冻融。
图表编号 | XD00160164400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.05.15 |
作者 | 焦亚飞、刘树林、叶升、石德顺、黄奔 |
绘制单位 | 广西大学动物科学技术学院、亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室、广西大学动物科学技术学院、亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室、广西大学动物科学技术学院、亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室、广西大学动物科学技术学院、亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室、广西大学动物科学技术学院、亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 |
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