《表1 绵羊IRS1基因的引物序列》

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《绵羊IRS1基因CDS区克隆、序列分析及其组织表达研究》

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利用人IRS1基因的mRNA序列（GenBank登录号为NM＿005544.2），在NCBI中BLAST搜索绵羊基因组4.0（Ovine Genome Assembly Oar＿v4.0），获得与人IRS1 mRNA高度相似的绵羊序列。用Primer 5.0设计3对引物P1、P2和P3，其中P1和P2引物用于克隆扩增绵羊IRS1基因的CDS全长序列，引物P3用于RT-qPCR分析，β-actin作为RT-qPCR的内参基因，这些引物由杨凌天润奥科生物科技有限公司合成，引物具体序列见表1。以一只空怀期小尾寒羊的背最长肌中获得的cDNA为模板，采用25μL反应体系进行PCR扩增：cDNA（约100 ng/μL）1μL、2×F8 FastLong PCR MasterMix 12.5μL、上、下游引物（0.25μmol/L）各0.5μL，加ddH2O至25μL；PCR扩增条件为：94℃预变性5 min，94℃变性15 s，59℃退火15 s，72℃延伸50 s，共37个循环，72℃延伸5 min，4℃保存。