《表1 实验前后细胞跨膜电阻的变化》

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《Caco-2细胞模型不同取样方式对药物表观渗透系数的影响》

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将Caco-2细胞培养于细胞瓶中，并置5%CO2、37±1℃培养箱中，细胞所需营养物质为15%DMEM高糖培养液（含有15%胎牛血清、1%非必需氨基酸、1%100 U·m L-1青霉素G以及100μg·m L-1链霉素）。待细胞生长至对数期后，采用灭菌后的PBS缓冲液清洗，并加入0.25%Trypsin-EDTA消化液消化细胞，于1.2×103r·min-1离心3 min，弃去上清液，并重新添加培养基吹打细胞，待细胞分散均匀后，对细胞进行台盼蓝染色并计数，以每毫升1×105个的细胞密度接种于Transwell 12孔板，其中，AP侧为0.5 m L相应密度的细胞悬液，BL侧为1.5 m L的DMEM高糖培养液，置恒温培养箱中，连续培养21 d。接种后的前一周，隔天换液，一周后，每天换液，并测量扩膜电阻值（TEER值），以跨膜电阻值来判定Caco-2细胞层的完整性，文献显示:当Transwell小室内的跨膜电阻值≥220Ω·cm2，可用于药物渗透性转运的模型[5]。记录实验前后的细胞跨膜电阻值，以判断实验结束后，细胞膜是否完整。实验前后的细胞跨膜电阻值见表1。Caco-2细胞单层细胞的TEER值大于300Ω·cm2，据文献中报道，当TEER值≥220Ω·cm2时，表明单层细胞的紧密型和完整性良好，建立的Caco-2细胞模型满足要求，可以用于Caco-2细胞转运实验。在实验前后，细胞跨膜电阻值虽略降低，但仍达到了单层细胞TEER值大于300Ω·cm2的要求，表明在实验过程中，细胞单层膜未被破坏。