《表4 黄草乌及其2个近缘种ITS2序列的遗传距离》

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《基于ITS2鉴别黄草乌及其近缘种掺混》

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采用引物ITS2F/ITS2R对黄草乌及其近缘种共计88个样品提取的DNA进行PCR扩增。结果显示，黄草乌、长喙乌头、马耳山乌头的ITS2片段长度均为208 bp，三者的种内K2P遗传距离分别为0.000～0.010、0.000～0.010、0.000～0.019；黄草乌与长喙乌头的种间K2P遗传距离为0.005～0.019，明显大于各自的种内K2P遗传距离；黄草乌与马耳山乌头的种间K2P遗传距离为0.010～0.029，大于等于黄草乌种内K2P遗传距离，但不大于马耳山乌头种内K2P遗传距离（见表4）。从序列比对结果看，16个产地黄草乌的ITS2片段长度为208 bp，在第113 bp、第185 bp、第191 bp处分别有G/T、A/C、G/A变异；长喙乌头和马耳山乌头的ITS2长度也为208 bp，其中在第93 bp、第157 bp、第196 bp处为长喙乌头的种内变异，在第57 bp、第62 bp、第76 bp、第141 bp、第182～183 bp处为马耳山乌头的种内变异。16个产地黄草乌在ITS2位点的第169 bp、第201 bp处为C、C，长喙乌头为T、C，马耳山乌头为C、T，通过这两个位点可将黄草乌与长喙乌头、马耳山乌头进行鉴别（见表5）。