《表5 转化因子正交试验GUS瞬时表达的方差分析(1)》

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《农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系》


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(1)*:差异显著Significant difference(P<0.05).

通过L16(45)的正交试验设计(表1),共进行了16组不同水平处理的转化因子组合试验,试验结果表明:GUS瞬时表达率高的处理组合其愈伤组织染色程度(图2)也更强(表4),其中侵染时间与共培养时间对GUS瞬时表达率有显著影响(P≤0.05),即侵染时间与共培养时间显著影响农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化效率,而AS浓度和预培养时间的影响不显著(表5)。比较均值可以发现GUS瞬时表达率随着侵染时间和共培养时间的增加以“S形”曲线上升(侵染时间的GUS瞬时表达率均值为:6 min 22.0%、8 min 16.0%、10 min 35.0%、15 min 33.8%;共培养时间的GUS瞬时表达率均值为:1天10.8%、2天16.5%、3天38.5%、4天41.0%),侵染10 min和共培养3天的GUS瞬时表达率达到了高值;4天的共培养时间虽然瞬时表达率均值更高,但提升较小并且对愈伤组织伤害较大。此外,虽然预培养时间对GUS瞬时表达率没有显著影响,但预培养5天的GUS瞬时表达率均值高于其他预培养时间(预培养时间的GUS瞬时表达率均值为:0天24.0%、2天17.8%、5天37.5%、10天27.5%)。根据这些试验结果可以获得农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的最佳转化因子组合是:预培养5天,侵染10 min,共培养3天。