《表2 小孢子再生植株的倍性分析》

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《三个油菜F_1组合小孢子培养及双单倍体结实性分析》

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小孢子培养后代群体是不同染色体倍性的混合，除了未加倍的单倍体，还有天然加倍或者加倍剂处理后产生的正常双单倍体、四倍体以及非整倍体或者嵌合体。利用流式细胞仪可测定植株细胞内核酸含量，确定被检测单株的倍性水平等，如果所示峰值位于荧光强度为100左右的被测样品为二倍体，位于荧光强度为50、200的分别为单倍体和四倍体，非整倍体可能是单倍体染色体的消除，所以在图示中为荧光强度50的位置，而分离峰纵坐标达到2 000（图1）。对用流式细胞仪初步测定的50株单倍体油菜进行0.1%秋水仙碱浸泡根系处理试验。接下来利用流式细胞仪对3个经过未加倍处理、不同浓度加倍剂处理小孢子培养的F1组合以及秋水仙碱浸根处理后获得的植株进行倍性分析，结果见表2和图2。由图2可知，F1组合6R×ZS11中有31.27%植株为双单倍体，组合7DH×ZS11中有49.60%植株为双单倍体，组合ZR×R11中有52.00%植株为双单倍体。不同秋水仙碱浓度处理试验结果显示，85 mg/L秋水仙碱处理小孢子后获得的双单倍体植株比例最高。不同浓度的氟乐林加倍剂处理试验显示，10μmol/L氟乐林处理小孢子后获得双单倍体比例较高。在3个不同F1组合基因型的小孢子培养试验中，秋水仙碱处理后获得的双单倍体的植株数高于氟乐林处理后的双单倍体数目，表明秋水仙碱在油菜小孢子阶段处理能够获得双单倍体的能力高于氟乐林加倍剂的处理作用。此外比较了3个F1组合中50个单倍体在0.1%秋水仙碱浸根处理后的加倍率，结果显示，F1组合6R×ZS11加倍率最高，为42%，组合7DH×ZS11为26%，组合ZR×R11为22%，表明不同基因型材料在浸根过程中对0.1%秋水仙碱处理的敏感性存在差异。分析3个F1组合小孢子培养过程中天然加倍率，统计分析显示，F1组合6R×ZS11天然加倍获得双单倍体率为23.73%，组合7DH×ZS11为21.35%，组合ZR×R11为25.00%，表明这3个F1组合基因型材料在小孢子培养过程中天然加倍率和基因型关联性不大，加倍率都低于秋水仙碱处理小孢子后再生成植株的加倍率，与氟乐林处理小孢子后再生植株的加倍率差异不大。总之，85 mg/L秋水仙碱处理上述3个F1杂交组合材料小孢子得到的双单倍体比例最高，效果优于天然加倍处理、不同浓度氟乐林处理以及浸泡单倍体油菜根系获得双单倍体的方法。