《表1 引物信息：巴什拜羊miR-486多态性及其表达规律研究》

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《巴什拜羊miR-486多态性及其表达规律研究》

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引物miR-486RTP带下划线的碱基为与bta-miR-486序列3'端互补的8个碱基；引物miR-486qR带下划线的碱基为bta-miR-486序列5'端互补的14个碱基；引物pre-miR-486EF和pre-miR-486ER带下划线的碱基表示酶切位点和保护碱基，斜体碱基表示限制性内切酶HindⅢ和Eco RⅠ的切割位点

检索miRBase数据库（www.mirbase.org），根据其收录的bta-miR-486序列（登录号:MI-MAT0009329）设计stem-loop qRT-PCR引物（表1），巴什拜羊miR-486的组织表达情况以骨骼肌中的表达量为对照，不同发育阶段骨骼肌中的表达情况以出生后90 d骨骼肌中miR-486的表达量为对照，对其组织表达和骨骼肌中时序表达情况进行相对定量。以空白对照细胞中miR-486表达量为对照，对转染突变型和野生型表达载体细胞中miR-486的表达情况进行相对定量。以U6基因（GenBank No.114110180）作为内参基因，结果采用2-ΔΔCt法计算，每个实验重复3次，并计算平均数及标准差。qRT-PCR反应采用20 uL体系：TB Green Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）（2×）（TAKARA，大连）10μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.8μL，cDNA模板2μL，ddH2O 6.4μL。扩增条件：95℃预变性30 s；95℃10 s，58℃20 s，72℃20 s，40个循环。扩增反应结束后以0.1℃/s的速度进行熔解曲线分析。所有引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。