《表1 实验处理设置:稻田土壤微生物驱动的微好氧亚铁氧化耦合碳同化过程》

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《稻田土壤微生物驱动的微好氧亚铁氧化耦合碳同化过程》


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采用凝胶梯度管法富集培养微氧型亚铁氧化菌(Emerson等,2010),分别以FeS和FeCO3为铁源底物,培养基采用MWMM(Modified Wolfe’s mineral medium),具体配方为:0.05g L-1K2HPO4·3H2O、0.1g L-1CaCl2·2H2O、0.2g L-1MgSO4·7H2O及1.0g L-1NH4Cl,并加入5mmol L-1的NaHCO3(或13C-NaHCO3)作为缓冲溶液和碳源,充CO2气体调节pH约为6.15.底层铁源的配制:将去除上清液的FeS和FeCO3与MWMM溶液等体积混合,再加入1%(wt/vol)的琼脂.上层培养基的配制:在MWMM溶液中分别加入1μL mL-1的维生素和矿物元素溶液,以及0.15%(wt/vol)的琼脂.待培养基静置24h形成半固态培养管后,将10μL接种液接种于配有MWMM培养基的凝胶培养管中.如表1所示,除接种处理(Inocula)以外,还设置三个对照:灭菌对照(Killed-inocula)、不接种对照(Non-inocula)、无底物对照(只含培养基,Agar only).每组处理设置3个平行样品.接种后置培养管于暗态下培养15d,培养温度为30℃.在培养0d、3d、6d、9d、15d时吸取培养管中的微生物生长环带(1~2mL),测试其微生物生长情况、碳同化量、亚铁氧化量以及成矿情况;同时提取两个接种处理中的总DNA,采用16S rRNA焦磷酸测序分析不同培养时间的微生物群落组成.