《表2 引物序列：壳聚糖对泌乳中期奶牛一氧化氮免疫调节途径的影响》

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《壳聚糖对泌乳中期奶牛一氧化氮免疫调节途径的影响》

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采用Trizol试剂盒（TaKaRa，大连）从PBMCs中提取总RNA，并测定其纯度与浓度。用Prime ScriPtTMRT试剂盒（No:DRR036A）将总RNA反转录为cDNA，其反应条件为：37℃，15 min；85℃，5 s。实时荧光定量PCR根据SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒（No:RR820A）说明书进行操作，其反应程序为：预变性95℃，30 s，共1个循环；变性95℃5 s，退火60°C 30 s，延伸72℃30 s，共40个循环；延伸72℃10 min，自动生成熔解曲线。本试验中β-肌动蛋白（β-actin）为内参基因，分别检测iNOS和NF-κB基因的表达，各目的基因表达量用2-ΔΔCt法计算。所需引物均由Primer 5和Olige 6软件设计，由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列见表2。