《表2 异丙甲草胺抗体与其结构类似物交叉反应》

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《除草剂异丙甲草胺特异性抗体制备及免疫检测方法的建立》

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注：ND表示不识别。

交叉反应数据见表2，根据文献报道[24-26]及异丙甲草胺自身结构特征，抗体的识别位点可能为：（1）氯乙酰基侧链；（2）烷氧基侧链；（3）苯环上烷基。因此本研究据此选取14种交叉反应药物来研究此抗体特异性。从选取的交叉反应结构对比来看（见图2），相比于异丙甲草胺，2-乙基-6-甲基-2-氯乙酰苯胺（CR，ND）和2-乙基-6-甲基-N-（1’-甲氧基-2’-丙基）苯胺（CR，ND）分别少了烷氧基侧链和氯乙酰基基团，但抗体却对它们完全不识别，说明此抗体对抗原的识别不在于某一个位点，而是具有多个识别位点。甲草胺（CR=1.64%）、丙草胺（CR=2.71%）、丁草胺（CR=2.69%）与异丙甲草胺结构相比，主要是烷氧基侧链的差别，说明烷氧基侧链在抗原识别中的重要性；但甲草胺，丙草胺，丁草胺三者差别不大，表明烷基侧链的长短对抗体识别的影响不显著。在以往研究中，张等[23]仅选取了部分酰胺类除草剂评价抗体特异性，结果显示交叉反应率低于0.5%，Hall等[27]将甲霜灵羧酸衍生物作为半抗原制备异丙甲草胺兔多抗，但该抗体与甲草胺（CR=23%）、甲霜灵（CR=5%）有较高的交叉反应，其特异性较差；Lawruk通过混合酸酐法将异丙甲草胺的巯基丁酸衍生物与BSA进行偶联，免疫兔子得到兔多抗，建立免疫磁珠ELISA方法，但对乙草胺（CR=13.0%）和甲霜灵（CR=15.2%）存在较高的交叉反应率[24]。Feng等[28]制备的兔多抗对硫醚代谢物存在交叉反应，也未进行实际样品的检测。而本文制备的多克隆抗体与异丙甲草胺结构类似物的交叉反应率均低于3%，抗体特异性更好。