《表3 荧光定量PCR反应》

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《不同月龄阶段关岭牛MYH3和MYH4基因mRNA表达水平的研究》

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实时荧光定量PCR反应是以c DNA为模板，采用10μL反应体系（表3），整个分析过程是定量的，采用荧光定量PCR仪（CFX96，Bio-Rad，USA）。GAPDH作为内参基因，得到优化以后，其反应条件最佳为：在50℃条件下，孵育2 min，并在94℃的条件下预先变性5 min，并在该条件下进行30 s的变性，最后进行30 s的退火操作（退火所需温度如表2所示），继而在72℃条件下进行30 s的延伸。需要进行检测的平行样品数为3个。当反应完成以后，可通过熔解曲线对PCR的反应特性进行研究判断，仅仅进行判断是不可行的，必须依据相应的定量分析结果，而其结果还需要依照标准曲线及Ct值的计算获取。