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绪论1

第一章 各种光学显微镜术4

第一节 复式显微镜4

一、显微镜的构造和各部分的用途5

(一)光学系统5

(二)机械装置8

二、显微镜的光学原理及其主要性能10

(一)显微镜的光学原理10

(二)显微镜的主要性能11

三、显微镜的使用和注意事项18

(一)观察前的准备工作18

(二)显微镜的照明操作20

(三)聚光器和物镜配合的操作和滤光片的选择22

(四)观察操作和油镜的使用24

(五)观察后的处理工作25

一、相差显微镜及其用途27

(六)镜检过程中遇到的问题和分析27

第二节 相差显微镜与活细胞观察27

二、相差显微镜的结构28

(一)环状光阑28

(二)相板29

(三)中心望远镜31

(四)光源和滤光器31

三、相差显微镜的原理32

(一)相差33

(二)衍射和干涉33

四、相差显微镜的用法36

(一)相差显微镜的装置36

(二)调焦和调光37

(三)中心调节37

(一)材料39

(四)相板的选择39

五、相差显微镜标本的制作39

(二)载玻片和盖玻片40

(三)封埋剂40

(四)染色42

第三节 暗视野显微镜43

一、暗视野显微镜及其用途43

二、暗视野显微镜的光学基础和照明特点43

(一)胶态体系的光学性质43

(二)暗视野显微镜照明的特点44

三、暗视野显微镜的结构45

(一)抛物面聚光器46

(四)辉光聚光器47

(五)同心球面聚光器47

(三)明暗两用聚光器47

(二)心形面聚光器47

四、暗视野显微镜的用法48

第二章 活体染色50

第一节 活体染色的定义、目的及染色机制50

一、何谓活体染色？50

二、活体染色与体外活体染色51

三、活体染色的机制51

第二节 活体染色的技术53

一、活体染色剂的分类53

二、染料溶液的配制和保存54

三、染色方法55

第三章 细胞器--线粒体和高尔基体的固定与染色法63

第一节 线粒体的固定和染色法63

一、固定和固定剂63

(一)Dietrich-Parat方法63

(二)Regaud方法64

(三)Benoit方法65

二、包埋和切片65

三、染色法65

(一)阿特曼(Altmann)氏染色法65

(二)Regaud染色法66

第二节 高尔基体的固定和染色法67

一、高尔基体的固定67

二、主要固定剂及其原理68

(一)硝酸银浸染法68

(二)四氧化锇浸染法70

(三)四氧化锇蒸气直接浸染法(汪德耀，1962)71

第四章 细胞化学72

第一节 细胞的核酸化学方法72

一、引言72

(一)鉴定核酸中的嘌呤和嘧啶的方法简述73

二、鉴定核酸的细胞化学方法73

(二)鉴定核酸中DNA的细胞化学方法76

(三)孚尔根显微分光光度计的用法84

(四)鉴定核酸中RNA的细胞化学方法89

第二节 蛋白质和氨基酸的细胞化学94

一、总论94

(一)单纯蛋白质94

(二)结合蛋白质94

二、方法及原理95

(一)Millon氏反应(Millon 1849)95

(二)Ninhydrin(苯骈环三酮戊烃的水合物)-Schiff和Alloxan(四氧嘧啶)-Schiff法［Yasuma(安间)和Ichikawa(市川)1953］96

(三)Sakaguchi氏反应98

(四)黄色蛋白反应99

(五)--SH基反应99

(六)Danielli双偶氮结合法101

(一)酶作用的一般特性107

第三节 酶的细胞化学107

一、关于酶的通论107

(二)酶的分类和命名简介110

二、关于酶的细胞化学的一般应注意的问题112

(一)扩散及吸附现象112

(二)对照试验115

(三)固定问题115

(四)酶催化反应专一性的相对性问题116

(五)酶细胞化学的定量分析116

(六)简述水解酶的一些例证117

第四节 糖的细胞化学120

一、多糖类121

(一)粘多糖122

(二)粘蛋白和糖蛋白123

(一)PAS反应124

二、糖类的细胞化学124

(三)糖脂类124

(二)过碘酸-Schiff反应的专一性问题125

(三)PAS阳性物质之间的区分126

(四)PAS反应的原理127

第五节 脂类的细胞化学129

一、脂肪的分类129

二、关于脂类物质的组织化学分析130

三、脂类的组织化学方法131

四、胞质反应134

五、胆固醇和固醇134

第五章 生物学中的放射自显影术136

第一节 放射自显影的基本原理136

一、基本原理137

(一)放射性同位素138

(二)乳胶139

(三)核子乳胶的选择140

一、宏观自显影141

第二节 放射自显影的基本操作方法141

二、显微放射自显影142

(一)方法简介142

(二)操作步骤148

三、电子显微镜放射自显影153

(一)电子显微镜放射自显影标本的制备155

第六章 细胞培养172

第一节 动物细胞的培养172

一、组织培养及其应用172

二、培养前的准备工作174

(一)器械的清洗和消毒174

(二)生理盐水的制备176

(三)培养基的制备180

(一)组织块培养法190

三、培养方法190

(二)细胞悬液培养法194

(三)器官培养法196

第二节 植物细胞融合198

一、原生质体培养与植珠的再生198

(一)材料的选择与酶液的制备198

(二)原生质体的分离与培养199

(三)原生质体的分裂与分化200

二、原生质体融合200

(一)原生质体分离200

(二)原生质体融合200

第七章 显微照相术202

第一节 照相原理与感光材料202

一、照相原理与相机的结构202

(一)照相原理202

(二)照相机的构造203

二、感光材料207

(一)感光片的结构与性能207

(二)相纸的结构与性能212

(三)感光材料正反面的辨别214

第二节 显微照相装置和照相程序214

一、小型显微照相装置及操作程序215

(一)主要构成部件215

(二)去镜头的显微照相机的照相程序216

(三)带镜头的小型显微照相机的照相程序217

二、带皮腔的立体和显微摄影两用机218

三、曝光时间219

四、放大率及测量方法220

第三节 底片的冲洗和晒印放大技术220

一、底片冲洗的步骤及原理220

(二)显影221

(一)水中浸润221

(三)停显225

(四)定影226

(五)水洗228

(六)晾干229

(七)其他(底片的减薄和加厚)229

二、晒印与放大技术230

(一)晒印230

(二)放大231

第八章 电子显微镜及其在生物学上的应用232

第一节 电子显微镜的结构原理232

一、引言232

(一)几个常用的基本概念--“分辨率”、“放大倍数”和“反差”232

(二)显微术的长度单位236

二、电镜的结构原理237

(一)光学透镜与电子透镜237

(二)电镜成像原理240

(三)电镜的主要构成部件及性能242

第二节 电子显微镜的发展及未来250

一、电镜的发展历史250

二、电镜技术的发展趋势252

(一)超高分辨本领252

(二)超高压电镜253

(三)扫描电镜(SEM)253

(四)电视电镜254

(五)透射扫描电镜(TSEM)255

(六)电镜与其他新技术的配合作用255

第三节 电子显微镜在生物学上的应用256

一、细胞学方面257

二、病毒结构研究方面257

四、癌病防治研究258

三、叶绿体超微结构的研究258

五、分子生物学方面259

六、动物中枢神经突触等方面的研究259

第九章 电镜的生物标本制备技术261

第一节 超薄切片法262

一、取材262

二、固定和固定剂的选择263

(一)固定的意义263

(二)几种常用固定剂263

(三)缓冲液和附加液265

(四)几种常用固定液及配方266

(五)固定方法及注意事项271

三、块染272

四、脱水273

五、渗透与聚合273

六、切片283

七、染色293

第二节 其他制样技术298

一、负染色技术298

二、表面复型法298

三、真空喷镀法299

四、冰冻超薄切片法300

五、冰冻蚀刻技术300

六、电镀放射自显影术301

七、抗原抗体法301

第十章 实验实例302

实验一、油镜的原理、使用和细胞形态观察302

实验二、几种特殊光学显微镜的原理及使用的演示307

实验三、液泡系(vacuome)和线粒体(mitochondria)的活体染色法315

实验四、高尔基体(Golgibody)和线粒体(mitochondria)的观察319

实验五、Feulgen反应321

实验六、Brachet反应326

实验七、过碘酸雪夫反应(PAS)显示糖元和其他多糖物质330

实验八、碱性磷酸酶显示法(根据Gomori)335

实验九、酸性磷酸酶显示法(Gomori氏1950)336

实验十、过氧化物酶(Peroxidase)显示法(根据McTunKin 1922)338

实验十一、快绿染色法显示细胞内碱性蛋白及酸性蛋白340

实验十二、细胞放射自显影341

实验十三、染色体标本制作技术345

实验十四、细胞的无丝分裂(amitosis)和有丝分裂(mitosis)的观察354

实验十五、细胞减数分裂(meiosis)和染色体的形态观察356

实验十六、生物样品的超薄切片法362

实验十七、参观电子显微镜368

实验十八、活细胞和细胞组分的分离与纯化372

实验十九、动物细胞线粒体的分离374

实验二十、同功酶垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术377

附录：某些酶的同功酶显色方法384

参考文献386