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第一章 区带离心法入门1

1.1．离心法在生物学中的主要应用1

目 录1

1.2．离心技术2

1.2.1．分析超速离心法2

1.2.2．差速沉淀法4

1.2.3．速率区带离心法6

1.2.4．等密度区带离心法7

1.3.1．离心机9

1.3．离心机和转头的发展9

1.3.2．转头材料11

1.3.3．转头形状11

1.3.4．区带转头12

1.4．离心技术的使用和限制16

1.5．离心机实验室的设计19

1.6．离心机的安全性21

1.6.1．转头毁坏的原因和预防办法21

1.6.1.2．腐蚀23

1.6.1.1．过速23

1.6.1.3．疲劳24

1.6.1.4．高密度的梯度液24

1.6.1.5．真空破坏25

1.6.1.6．转头内液体冻结25

1.6.2．离心机操作中的其它注意事项25

1.6.2.1．靠近运转的转头25

1.6.2.2．液雾的形成26

1.6.2.3．电子线路的安全性26

1.6.2.6．漏水27

1.6.2.7．可燃的溶剂27

1.6.2.4．转头的平衡和组装27

1.6.2.5．离心机和转头的配合27

1.7．转头的保养28

1.7.1．转头的选择28

1.7.2．制造转头材料的性质和保养28

1.7.3．转头的洗涤和干燥32

1.7.4．组装、拆卸和贮存33

1.7.5．每个转头的保养33

1.8．转头的保证寿命35

第二章离心分离的理论37

2.1．速率区带分离的理论37

第九章密度梯度离心展望 238

2.1.1．颗粒的沉降理论38

2.1.2．样品区带的稳定性41

2.1.3．沉降区带的稳定性47

2.2．等密度区带法的理论49

2.2.1．等密度区带法分离的区带形状49

2.2.2．密度梯度溶质在离心场中的再分布50

2.2.3．转头对梯度形状的影响53

2.3．密度梯度溶质对亚细胞结构的影响54

第三章离心分离的条件59

3.1．方法的选择59

3.2．转头的选择64

3.3．密度梯度材料68

3.3.1．碱金属盐68

3.3.2．小的亲水有机分子69

3.3.3．高分子量的有机化合物71

3.3.4．其它类型的密度梯度材料72

3.3.5．梯度材料的选择78

3.4.1．速率区带分离的梯度79

3.4．梯度的选择79

3.4.2．等密度分离的梯度81

3.4.3．复合梯度的设计82

第四章在普通转头中的离心87

4.1．速率区带离心87

4.1.1．密度梯度的制备87

4.1.2．将样品铺于梯度上93

4.1.3．离心94

4.1.4．收取梯度97

4.1.5．监测所替换的梯度101

4.2．等密度区带离心103

4.2.1．密度梯度的制备103

4.2.2．将样品铺到梯度上105

4.2.3．离心106

4.2.4．替换和监测梯度106

第五章在区带转头中的离心108

5.1.1．转头的结构110

5.1．普通的非再定向的区带转头110

5.1.2．区带转头的类型120

5.1.2.1．A-Ⅻ转头120

5.1.2.2．Z-15转头121

5.1.2.3．HS转头122

5.1.2.4．B-Ⅳ转头123

5.1.2.5．B-ⅩⅣ和B-ⅩⅤ转头124

5.1.2.6．B-ⅩⅩⅨ和B-ⅩⅩⅩ转头125

5.1.2.7．一次型和连续流动型可互换的转头127

5.1.2.8．连续流动转头129

6.1.2.9．其它转头130

5.1.3．区带转头的操作131

5.1.3.1．离心的准备132

5.1.3.2．加梯度141

5.1.3.3．加样品143

5.1.3.4．加速、转动和减速150

5.1.3.5．取样155

5.1.3.6．监测和部分收集161

5.1.4．附属装备166

5.1.4.1．梯度仪167

5.1.4.2．泵168

5.1.4.3．折射仪和密度计169

5.1.4.5．流动池171

5.1.4.4．分光光度计、比色计和紫外计171

5.1.4.6．温度计172

5.1.4.7．灌注泵172

5.1.4.8．闪频光源172

5.1.4.9．记录器172

5.1.4.10．冷却装备173

5.1.4.11．次要的附件173

5.1.4.12．部分收集器174

5.1.4.13．积分仪175

5.2．再定向区带转头175

第六章 密度梯度离心部分收集各级分的分析183

6.1．各级分的酶和化学分析183

6.2．各级分的电子显微镜检测184

6.3．密度梯度分离结果的分析185

6.4．沉降系数的计算189

第七章密度梯度离心的应用190

7.1．活细胞的分离190

7.2．哺乳动物组织细胞器的分离193

7.2.1．粗制核级分的再分离和大片质膜的分离194

7.2.1.1．提纯细胞核196

7.2.2．线粒体级分的再分离197

7.2.3．溶酶体级分的再分离198

7.2.4．微粒体的再分离202

7.2.5．分离核糖核蛋白体206

7.2.6．染色质的分离209

7.3．分离植物细胞的亚细胞结构210

7.4．从单细胞生物分离亚细胞成分213

7.5．大分子的分离216

7.5.1．核酸216

7.5.2．蛋白质219

7.6．密度梯度离心在生物化学中的其它应用220

7.6.1．血清脂蛋白的分离220

7.6.2．分离病毒223

7.7．密度梯度离心的其它应用226

第八章离心分离时出现的假象227

8.1．离心期间对颗粒的损伤227

8.1.1．由沉淀引起的损伤228

8.1.2．由高流体静压引起的损伤229

8.1.3．由高浓度的梯度溶质引起的损伤229

8.2．影响密度梯度收集的各级分精确测定的因素230

8.2.1．梯度溶质和测定分离组分时所用试剂间的反应231

8.2.2．对分析仪器操作的影响232

8.2.3．梯度溶质对检定灵敏度的干扰232

8.3.1．颗粒密度234

8.3．测定颗粒密度和沉降系数中的误差 .234

8.3.2．沉降系数235

9.1．离心机设计239

9.2．离心转头的发展240

9.3．辅助系统的发展242

9.4．离心方法的应用243

附录245

参考文献253