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第一版前言1

第一章 绪论1

第二版前言1

1.1生物大分子液相色谱分离和制备的发展动向2

1.2 分离介质的发展3

1.3 分离模式的考虑5

1.3.1 体积排阻色谱5

1.3.2 离子交换色谱6

1.3.3 反相色谱6

1.3.4 疏水作用色谱7

1.3.5 亲合色谱8

1.4 分离规模的扩大8

第二章液相色谱的基本原理和参数12

2.1 保留值13

2.1.1 保留时间（tR）和保留体积（VR）13

2.1.3 容量因子（R＇）14

2.1.2 调整保留时间（tK）和调整保留体积（VR）14

2.1.4 死时间lR的测定16

2.1.5 选择性（α＇）和相对保留值（α）17

2.2 柱效率18

2.2.1 塔板理论的提出18

2.2.2 塔板数和塔板高度的计算18

2.3 分离效能总指标K1和分离度R21

2.3.1 定义21

2.3.2 K1（或R）与α＇（或α）和N之间的关系22

2.4 谱带扩张24

2.4.1 柱内谱带扩张25

2.4.2 柱外谱带扩张30

2.5 渗透性32

第三章高效液相制备色谱的分离选择34

3.1 制备色谱分离的一般考虑35

3.1.2 切割收集技术36

3.1.1 制备色谱运行的模式36

3.1.3 微量组分的制备40

3.1.4 实验条件的一般选择41

3.2 制备色谱模型的讨论41

3.3 实验条件的选择与产量44

3.3.1 柱体积与填料44

3.3.2 流动相47

3.3.3 样品的溶解度54

3.3.4 样品量56

3.3.5 样品纯度的确定57

3.3.6 最佳制备量57

3.4 制备色谱仪59

3.4.1 泵系统59

3.4.2 检测系统61

3.4.3 进样系统62

3.4.5 循环系统66

3.4.4 样品的收集66

3.5 中低压液相制备色谱69

3.5.1 低压液相色谱69

3.5.2 中压液相色谱70

第四章制备柱及相关技术76

4.1 制备规模76

4.1.1 在分析柱上的制备76

4.1.2 小规模的制备76

4.1.3 大规模的制备77

4.2 色谱柱和装填技术77

4.2.1 色谱柱77

4.2.2 色谱柱的装填技术82

4.3 径向流动色谱84

4.3.1 径向流动色谱设计的原理85

4.4.1 灌注色谱概念的提出86

4.4 灌注色谱86

4.3.2 径向流动和轴向流动的比较86

4.4.2 灌注色谱的基本特征87

4.5 柱容量及其影响因素90

4.6 蛋白质定量与纯度标准95

4.6.1 蛋白质定量95

4.6.2 蛋白质纯度标准96

第五章顶替色谱100

5.1 顶替色谱的原理100

5.2 顶替色谱的特性101

5.2.1 操作线101

5.2.2 溶质的流速102

5.2.3 总效率104

5.3 顶替色谱实验条件106

5.3.1 顶替剂及其选择106

5.3.2 流动相的选择及影响108

5.3.3 填料及其影响109

5.3.4 柱直径及其影响111

5.4 溶质-溶质顶替色谱111

5.4.1 实验设计111

5.4.2 操作参数113

5.4.3 多次顶替117

第六章体积排阻色谱119

6.1 体积排阻色谱理论119

6.1.1 保留模型119

6.1.2 保留机理120

6.2 体积排阻色谱理论模型122

6.2.1 硬球体溶质模型123

6.2.2 刚性分子溶质模型123

6.2.3 任意平面孔模型-刚性溶质123

6.3 体积排阻色谱填料124

6.3.1 有机填料124

6.2.4 任意弯曲溶质模型124

6.3.2 无机填料125

6.3.3 适合生物大分子分离的填料125

6.4 体积排阻色谱参数的讨论126

6.4.1 峰容量127

6.4.2 聚合物在体积排阻色谱上的分离127

6.4.3 分子量的准确测定129

6.5 体积排阻色谱操作条件131

6.5.1 填料131

6.5.2 柱长131

6.5.3 洗脱液132

6.5.4 流速133

6.5.5 样品容量133

6.5.6 蛋白质在变性洗脱条件下的分离134

6.6.1 蛋白质的分离135

6.6 蛋白质在体积排阻色谱上的保留行为135

6.6.2 蛋白质的分子量与容量因子（R＇）136

6.6.3 分配系数（Kd）137

6.6.4 pH不同时的分配系数与离子强度137

6.6.5 在一定pH条件下蛋白质的分离度和离子强度138

6.6.6 离子强度恒定时pH对分配系数的影响139

第七章离子交换色谱143

7.1 填料143

7.1.1 有机树脂填料144

7.1.2 无机-有机复合填料145

7.1.3 表面改性的无机填料及合成方法145

7.2 参数讨论151

7.2.1 孔径的影响151

7.2.2 柱长的影响152

7.2.3 流速的影响153

7.2.4 pH的影响153

7.2.5 离子强度的影响158

7.3 保留模型160

7.4 离子交换色谱分离和纯化蛋白质162

7.4.1 大豆中混合蛋白质的分离和纯化162

7.4.2 细胞色素C663的分离和纯化166

7.4.3 β-半乳糖苷酶和磷酸酶的分离和纯化167

7.4.4 卵清蛋白（OVA）和大豆蛋白（STI）混合物的纯化168

7.4.5 TGF-α-β-半乳糖苷酶的分离169

7.4.6 肿瘤坏死因子（TNF）的分离170

第八章反相液相色谱173

8.1 溶质保留机理与收敛性173

8.1.1 保留机理173

8.1.2 保留值收敛性175

8.2 填料及一般合成方法185

8.2.1 填料概述185

8.2.2 填料合成的一般方法187

8.3 分离和制备色谱的选择189

8.3.1 柱容量与分离度190

8.3.2 色谱柱的柱效率与蛋白质的分离度192

8.3.3 流动相的选择192

8.3.4 柱温的影响195

8.3.5 流速的影响197

8.4 蛋白质在柱上的回收率198

8.4.1 上柱量与回收率的关系198

8.4.2 洗脱系统与回收率的关系199

第九章高效疏水作用色谱202

9.1 高效疏水作用色谱的原理202

9.2 高效疏水作用色谱填料205

9.2.1 基质205

9.2.2 配基206

9.3 实验条件216

9.3.1 盐的影响217

9.3.3 pH值的影响219

9.3.2 离子强度的影响219

9.3.4 柱温的影响221

9.4 疏水作用色谱与反相色谱的区别223

第十章亲合色谱229

10.1 亲合色谱的概念及其理论模型229

10.1.1 概念229

10.1.2 解离常数和分配系数230

10.2 亲合色谱的基质及控制因素232

10.2.1 理想基质的性质232

10.2.2 基质的控制因素233

10.2.3 具有实用价值的基质235

10.3 亲合色谱填料的合成235

10.3.1 配位体的选择235

10.3.2 基质的活化和功能化238

10.3.3 间隔臂分子241

10.3.4 间隔分子与配位体偶联242

10.4 亲合色谱的洗脱246

10.4.1 平衡和平衡缓冲液246

10.4.2 蛋白质的浓度和温度效应246

10.4.3 流速和样品体积247

10.4.4 洗脱方法248

10.5 蛋白质及其它生物大分子的分离和纯化250

10.5.1 纯化调节细胞功能的大分子和复杂的生物结构250

10.5.2 亲合色谱在分析化学中的应用253

第十一章蛋白质的制备色谱设计262

11.1 蛋白质分析色谱和蛋白质制备色谱262

11.2 吸附-解附的理论263

11.2.1 疏水作用色谱中的吸附-解附267

11.2.2 亲合色谱中的吸附/解附268

11.3 制备规模的扩大268

11.3.1 样品的来源268

11.3.3 色谱柱超载269

11.3.2 循环系统269

11.3.4 柱体积的增大271

11.3.5 蛋白质的产量与产率271

11.4 混合蛋白质在反相色谱上的制备272

11.4.1 实验方法运行设计272

11.4.2 实验条件272

第十二章高效液相色谱的应用279

12.1 核苷和核苷酸的分离279

12.1.1 pH对保留行为的影响279

12.1.2 流速对核苷分离的影响280

12.1.3 甲醇含量的变化对容量因子R＇的影响281

12.1.4 核苷和核苷酸的分离282

12.2 糖蛋白的分离和纯化290

12.2.1 基因重组人体白细胞IL-2的分离和纯化291

12.2.2 立体排阻色谱纯化膜糖蛋白抗原293

12.2.3 亲合色谱分离纯化多糖人体免疫球蛋白的亚类295

12.2.4 基因重组人体白细胞干扰素的反相色谱分离和纯化296

12.3 灌注快速蛋白质色谱299

12.3.1 灌注反相色谱分离血管扩张素异构体299

12.3.2 灌注离子交换色谱快速分离蛋白质302

12.3.3 灌注疏水作用色谱快速分离免疫球蛋白302

12.3.4 灌注免疫生物金属络合物亲合色谱304

12.3.5 灌注生物特异性的亲合色谱304

12.4 单克隆抗体的分离和纯化305

12.4.1 分析分离系统305

12.4.2 分离纯化系统308

12.4.3 腹水和组织培养中单克隆抗体的分离和纯化310

12.5 人体血清中脱脂蛋白质的分离和纯化313

12.5.1 样品的制备313

12.5.2 色谱分离纯化系统314

12.6 α-淀粉酶的分离和纯化316

12.6.1 亲合色谱分离纯化α-淀粉酶316

12.6.2 疏水作用色谱分离纯化α-淀粉酶319

12.6.3 离子交换色谱快速纯化α-淀粉酶321

第十三章生物样品的制备325

13.1 材料选择及预处理325

13.2 细胞的破碎326

13.2.1 物理法326

13.2.2 生物化学法327

13.2.3 化学处理法327

13.3 提取327

12.3.1 蛋白质和酶的提取328

12.3.2 核酸的提取330

13.4 蛋白质和酶的初步提纯331

13.4.1 核酸沉淀法331

13.4.4 选择变性法332

13.5 核酸的水解332

13.4.5 盐析法332

13.4.2 蛋白质沉淀法332

13.4.3 改变pH值332

13.6 生物多糖的分离提取334

附录一国外常用的适于生物大分子分离分析的高效液相色谱填料335

表1 高效体积排阻色谱（SEC）填料335

表2 反相色谱（PRC）填料（大孔）338

表3 疏水作用色谱（HIC）填料341

表4 离子交换色谱（IEC）填料342

1.亲合色谱常用的底物（基体）346

表5 亲合色谱（AFC）填料346

2.一些代表性的亲合色谱填料举例347

附录二典型蛋白质性质348

表1 一些蛋白质的分子量348

表2 几种蛋白质的等电点349

表3 不同类型的蛋白质的溶解度349

索引350

英文目录354