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绪论1

第一章核酸化学组分的结构和性质4

一、核酸的一般化学组分4

二、糖环的折叠形式4

1．信封式5

2．扭转式5

三、核苷的顺反构象6

四、核酸的修饰组分8

3．含有C-C糖苷健的核苷9

2．含有修饰核糖的核苷9

1．含有修饰碱基的核苷9

五、核酸及其组分的化学反应16

1．水解反应16

2．β-消除反应17

3．肼解反应19

4．与羟胺的反应19

5．亲电取代反应20

6．加成反应20

7．脱氨反应21

8．与甲基氢氧化汞和醛类的反应21

9．核糖的氧化反应22

六、核酸组分的分离鉴定23

10．糖的脱水反应23

参考文献25

第二章核酸的分离纯化28

一、核酸在细胞中的存在状态、分布、含量及大小28

二、分离纯化核酸时的注意事项29

三、核酸的分离提取31

1．破细胞31

2．核蛋白的解聚和蛋白质的去除32

3．核酸的沉淀33

6．核酸制剂纯度的初步鉴定34

4．其他杂质的去除34

5．核酸制剂的保存34

7．核酸分离提取实例35

四、核酸的纯化37

1．超离心37

2．胶电泳43

3．柱层析56

4．体外重组DNA法61

5．R-loop法62

6．免疫法62

参考文献63

第三章核酸工具酶65

一、核酸水解酶65

1．核酸酶65

2．RNA酶68

3．DNA酶70

二、其他工具酶74

1．磷酸单酯酶74

2．多核苷酸磷酸化酶75

5．大肠杆菌DNA聚合酶I和Klenow酶76

4．末端脱氧核苷酸转移酶76

3．T4多核苷酸激酶76

6．T4 DNA聚合酶77

7．大肠杆菌多聚（A）聚合酶77

8．反转录酶77

9．DNA连接酶77

10．T4 RNA连接酶78

11．DNA甲基化酶78

参考文献79

第四章核酸的体外标记和DNA物理图谱的构建81

一、核酸的体外标记81

1．5＇-末端标记82

2．3＇-末端标记83

3．T4 DNA聚合酶合成标记的DNA84

4．切口平移85

5．随机引发的DNA标记86

6．体外转录合成标记的RNA链86

7．标记反应的检验和标记产物的分离87

8．非放射性标记88

二、DNA物理图谱的构建89

1．部分酶解法90

3．末端标记-部分酶解法91

2．多酶降解法91

4．Bal 31逐步降解法92

5．重组粘性质粒限制性片段分析法93

参考文献93

第五章DNA的结构95

一、DNA的一级结构96

1．Sanger的酶法——链末端终止法或双脱氧法98

2．Maxam-Gilbert化学法109

3．电子计算机在顺序分析中的应用115

4．一级结构分析进展及其在核酸研究中的作用115

1．双螺旋模型的依据127

二、DNA的二级结构——双螺旋结构模型127

2．双螺旋模型的特征129

3．DNA二级结构的稳定因素132

4．双螺旋结构的构象变异135

5．左螺旋Z-DNA138

三、DNA的三级结构142

1．超螺旋142

2．超螺旋状态的定量描述143

3．DNA超螺旋的鉴定144

4．拓扑异构酶146

5．生物体内的超螺旋结构149

四、变性与复性153

1．变性153

2．复性158

3．分子杂交161

参考文献163

第六章RNA的结构165

一、RNA的一级结构分析166

1．片段重叠法166

2．直读法172

1．tRNA175

二、RNA的类型及结构175

2．rRNA184

3．rnRNA197

参考文献205

第七章细胞小RNA、线粒体和叶绿体核酸、病毒核酸以及具有生物活性的核苷酸、寡核苷酸207

一、细胞小RNA207

1．真核生物细胞中的小RNA207

2．原核生物细胞中的小RNA211

二、线粒体核酸和叶绿体核酸212

1．线粒体核酸212

3．病毒感染的细胞中的小RNA212

2．叶绿体核酸217

三、病毒、类病毒和拟病毒核酸220

1．病毒核酸220

2．卫星病毒和卫星RNA223

3．类病毒核酸223

4．拟病毒核酸225

四、具有生物活性的核苷酸和寡核苷酸225

1．单核苷多磷酸类225

2．二核苷多磷酸和寡核苷多磷酸类226

参考文献227

4．核苷酸衍生物227

3．环核苷酸类227

第八章核酸的人工合成229

一、核酸小片段的人工合成229

1．化学合成229

2．酶促合成234

二、核酸大分子的人工合成236

1．DNA连接酶催化合成核酸大分子236

2．RNA连接酶催化合成核酸大分子238

3．用DNA聚合酶和反转录酶催化合成核酸大分子240

三、核酸人工合成的实际应用240

4．制备限制性内切酶识别顺序的接头241

5．研究核酸结构与功能241

1．合成基因241

3．制备聚合反应的引物241

2．制备分子杂交用探针241

6．基因定向突变242

参考文献242

第九章DNA的体外重组243

一、待克隆DNA片段的产生244

1．限制性内切酶降解244

4．人工合成DNA245

2．机械剪切245

3．合成cDNA245

5．聚合酶链反应扩增特定的基因片段246

二、克隆载体248

1．质粒248

2．λ噬菌体载体249

3．粘性质粒252

4．真核生物细胞的克隆载体252

三、DNA分子的体外连接253

1．粘性末端的连接253

四、重组DNA分子转入受体细胞254

五、重组子的选择和鉴定254

2．平头末端的连接254

3．加同聚物尾254

1．遗传学方法255

2．菌落（或噬菌斑）原位杂交法255

3．免疫化学法255

4．胶电泳鉴定255

5．杂交阻抑翻译法和杂交释放翻译法255

六、克隆基因的表达257

参考文献257