《奥利亚罗非鱼DMRT1基因的克隆及其性别决定机制的研究》高清PDF

DMRT（DM-relatedtranscriptionfactor）基因是哺乳类，爬行类，鸟类，以及鱼类等动物上的性别相关基因，形成DMRT基因家庭，编码一种结合在DM-bindingmotif（DM-domain）的蛋白质，DMRT1基因在鱼类雄性分化方面起着关键的作用。它含有果蝇里的dsx（double-sex）基因和线虫里的mab-3基因共有的DM-domain（doublesex和mab-3基因编码的蛋白质结合的DNA基序）。本研究拟对奥利亚罗非鱼的DMRT1基因与其它鱼类的DMRT1基因进行比较、分析，为以后进一步研究罗非鱼性别分化相关基因打下基础。1.DM-domain区的扩增根据已知鱼类DM-domain区的保守序列，设计上游引物P1和下游引物P3，扩增得到奥利亚罗非鱼DMRT1基因的DM-domain区序列158bp，将158bp碱基片段在NCBI网站上进行BLASTP分析，扩增出的158bp碱基与尼罗罗非鱼的DMRT1基因同源性最高，达到148个相同的碱基，96%的相似性。其次为黑鲷的DMRT1基因，由于扩增出的区域是DM-domain的保守序列，所以在虹鳟，乌拉圭牙汉鱼，黑青斑河豚，红鳍东方鲀，黄鳝，大西洋真鳕，青鳉鱼等动物的DMRT1基因中都呈现出较高的相似性。2.雄鱼特异条带的扩增（malespecificmotif）根据得到的DM-domain区的保守序列，设计上游引物P5，根据已知鱼类malespecificmotif的保守序列，设计下游引物P4，扩增得到481bp，，其中奥利亚罗非鱼DMRT1基因的雄鱼特异保守序列（malespecificmotif）72bp，将malespecificmotif碱基片段在NCBI网站上进行BLASTP分析，与尼罗罗非鱼的DMRT1基因同源性最高，100%的相似性。其次为黑鲷的DMRT1基因，在虹鳟，乌拉圭牙汉鱼，黑青斑河豚，红鳍东方鲀，黄鳝，大西洋真鳕，青鳉鱼等动物的DMRT1基因中都呈现出较高的相似性。3.3’RACE的扩增根据扩增出的DM-domain的序列，设计上游引物Primer5，Primer6，用3’-RACE（rapidamplificationof

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