《表4 酵母双杂筛库获得ZmpTAC2的互作蛋白质》

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《玉米pTAC2影响苗期叶片叶绿素合成的转录组分析》

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表中黑色加粗为后续酵母双杂点对点验证的基因

为进一步研究ZmpTAC2在玉米细胞内的功能，通过筛选相互作用蛋白，找到了与ZmpTAC2共同调控叶绿体发育和叶绿素合成的蛋白。通过验证，在SD/-Trp培养基上诱饵蛋白ZmpTAC2生长良好，无毒性（图7-B)；p GADT7+pGBKT7-ZmpTAC2在SD/-Trp/-Leu/-His和SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade上无法生长，证明诱饵载体p GBKT7-ZmpTAC2无自激活（图7-C）。确定诱饵载体p GBKT7-ZmpTAC2可以用于直接与玉米c DNA文库杂交。通过筛选，共获得了120个阳性克隆。对阳性克隆进行菌落PCR的鉴定，随后在NCBI BLAST上进行序列比对。去除发生移码突变的基因及未注释的基因，共得到32个可能与pTAC2互作的蛋白（表4）。进一步分析这些基因，发现其中16个为核基因编码蛋白，10个为叶绿体基因编码蛋白。例如核编码的Zmp TAC3、α/β水解酶、histone H2A和CPN60等基因；叶绿体编码的CRS1、ATP-dependent DNA helicase等基因。结合转录组分析，将ZmpTAC3(Zm00001d032790）、CPN60(Zm00001d038857）和ATP-dependent DNA helicase(Zm00001d007417）定为候选基因进行点对点验证。结果表明，ZmpTAC2和ZmpTAC3在酵母系统中存在互作（图7-D）。