《表5 样本检测结果：荧光免疫层析技术定量检测蓖麻毒素》

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《荧光免疫层析技术定量检测蓖麻毒素》

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蓖麻毒素作为一种广泛存在于自然中、容易获得的致命毒素，人们对它的检测研究从未懈怠过。本研究利用亲和层析法、凝胶过滤法纯化法获得蓖麻毒素蛋白，将获得的毒素蛋白分别免疫昆明小鼠和白兔，获得单克隆抗体和多克隆抗体，将获得的抗体分别作为包被抗体和捕获抗体建立了荧光免疫层析试剂，配合荧光免疫检测仪YG10作为定量试剂，灵敏度为1 ng/mL，对试剂进行3个批次，500份/批的放大实验，并对3批试剂进行性能评价：重复性实验、特异性检测、稳定性实验、样本检测能力实验等。在重复性实验中发现，检测高、中、低3个浓度，每个浓度检测15次，在检测相同浓度时，仪器扫描获得C信号值的CV为8%～11%、T信号值CV为10%～14%，T/C比值的CV为8%～11%，T/C重复性明显更好，原因在于：（1）在结合垫制备过程中不均匀；（2）样本的差异；（3）检测时环境温度、湿度等。所以C除了有质控试剂的功能，对检测结果起到了矫正作用，避免了上述问题。所以，以浓度和T/C拟合曲线检测蓖麻毒素1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL的批内、批间精密度均不大于10%；特异性实验检测相近蛋白50 ng/mL、500 ng/mL的相思子毒素、相思子毒素、相思子凝集素、蓖麻凝集素、葡萄球菌肠毒素、蓖麻毒素、小牛血清白蛋白、胎牛血清、蛋白胨，每个样本检测3次，反应均为阴性，试剂特异性良好；并且对常规食品、血清等做了模拟样本检测，发现试剂检测食品能力良好，检测灵敏度同样为1 ng/mL；最后对试剂进行了14个月常温稳定性实验，在14个月内，试剂的检测能力没有变化。此外，该试剂成本低、操作简单、常温储存、方便携带，适用于野外环境操作，可以完成Ricin的定量检测，并且灵敏度高、快速、准确，可以应用于食品和环境中蓖麻毒素的检测。